果蝇硒蛋白D-SelK原核表达及多克隆抗体制备

摘要：

[目的]克隆编码果蝇硒蛋白D-SelK结构基因并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗D-SelK的抗体.[方法]利用PCR从pGM-T-D-SelK质粒中扩增D-SelK基因,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-D-SelK,以重组质粒转化E.coli BL21 (DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,通过变性、电泳纯化D-SelK蛋白,SDS-PAGE和Westem blot方法鉴定目的蛋白的表达；以表达的D-SelK蛋白免疫家兔,制备抗D-SelK的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.[结果]扩增了D-SelK基因,克隆于表达载体pGEX-6p-1中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确.经诱导在大肠杆菌中表达出目的蛋白,纯化后免疫家兔,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶51 200以上,且具有良好的特异性.[结论]已成功构建D-SelK基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达；制备出兔抗D-SelK抗体,效价及特异性均良好,这为进一步研究功能特异性的D-SelK提供了有效的手段.

关键词：果蝇硒蛋白、D-SelK、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：28

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助30671176;辽宁省教育厅资助2009A310;辽宁省科学技术计划项目2010225036

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：844-846,850