重叠延伸PCR合成风疹病毒E1蛋白抗原肽基因及其表达
[目的]利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础.[方法]利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化；设计多对寡核苷酸引物,以重叠延伸PCR法合成相应抗原肽段,克隆后测序鉴定.再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a；利用IPTG诱导抗原肽段的表达,SDS-PAGE和Western blot法分析表达产物.[结果]经过6轮重叠延伸PCR扩增,成功获得与预期目的序列一致的风疹病毒E1基因抗原肽并构建获得重组质粒pET32-rE1；在37℃下分别以终浓度为1 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导抗原肽表达,SDSPAGE和Western blot法检测到预期的蛋白条带；且以IPTG 终浓度为1 mmol/L诱导6h后表达量最高.[结论]成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因抗原肽段,构建其原核表达载体pET32-rE1并表达该抗原肽.
风疹病毒E1基因、抗原肽、重叠延伸PCR、密码子优化、原核表达
28
R373.1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
广东省科技计划项目国际合作项目2009B050700030;广东省科技计划社会发展项目2010B031600108;2011年广东省教育部产学研结合项目2011B090400155
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
830-833
