与14-3-3ζ相互作用的蛋白Polo样激酶1的筛选与鉴定

摘要：

[目的]应用酵母双杂交系统筛选与14-3-3ζ相互作用的蛋白,进一步鉴定其与Polo样激酶1(Plkl)相互作用.[方法]构建pGBKT7-14-3-3ζ诱饵表达载体,筛选HeLa细胞cDNA文库中与14-3-3ζ相互作用蛋白,进一步通过共转酵母、免疫荧光以及外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验验证两者的相互作用.[结果]通过酵母双杂交系统筛选出的阳性相互作用蛋白中包括Plk1,进一步通过共转酵母,外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验证实两者的相互作用,免疫荧光实验证实两者共定位于有丝分裂过程中胞质分裂期的中体.[结论]Plk1是高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在中体的成熟,有丝分裂期染色体的分离,胞质分裂以及DNA的损伤应答等环节发挥重要作用,其与14-3-3ζ的相互作用为14-3-3蛋白家族参与有丝分裂(M期)的调控提供了直接证据.

关键词：14-3-3蛋白、Polo样激酶1、酵母双杂交、蛋白质相互作用、有丝分裂

所属期刊栏目：28

分类号：R392-33

资助基金：国家自然科学基金30801329;安徽省优秀青年基金资助10040606Y19;教育部霍英东教育基金会高等院校青年教师基金131033

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：804-807