错配PCR技术提高抗hIL17A单链抗体亲和力的研究

摘要：

目的:通过错配PCR技术提高1株人源化抗hIL17A单链抗体(scFv)的亲和力,为进一步开发治疗类风湿性关节炎(RA)的人源化抗体药物奠定基础.方法:本研究采用错配PCR和重叠PCR的方法,对抗体的重链、轻链可变区分别随机引入突变,并将细菌内膜展示技术和流式细胞技术(FCM)相结合进行高通量筛选,获得高亲和力突变株.由于hIL17A能刺激HeLa细胞产生白细胞介素IL-6和IL-8,因此scFv突变株经表达纯化后,利用real-time PCR技术在mRNA转录水平上检测其阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力.结果:筛选出5株突变株,经流式细胞仪检测其中有3株亲和力与亲本相比有很大程度的提高,2株与亲本相当,而且所有突变株均保留了亲本与hIL17A的结合能力,经real-time PCR检测证明这5株突变株均有阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力,突变株的亲和力与中和效果成正比.结论:错配PCR技术是抗体体外亲和力提高的一种可行性方法,在保证与抗原结合能力的基础上提高了其亲和力和中和活性.该实验结果为RA的靶向治疗提供了候选药物,而且也为抗体的体外亲和力的提高提供了参考方法.

关键词：hIL17、亲和力成熟、细菌展示技术、FCM、real-time PCR、单链抗体

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：哈尔滨市科技创新人才发展计划2006RFXXS002;东北农业大学创新团队发展计划2006;黑龙江省教育厅项目200711521022;哈尔滨市科技创新人才研究专项资金2008RFQXS017;国家自然科学基金201031001084

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：722-725,732