Nanog基因的原核表达及抗体制备

摘要：

目的:在大肠杆菌中表达Nanog融合蛋白,制备兔抗小鼠Nanog融合蛋白抗体.方法:从含小鼠Nanog基因的pNA992质粒中扩增出小鼠Nanog基因并插入pET-32a中构建pET-32a-Nanog重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,得到了Nanog融合蛋白,并经Histrap亲和层析柱纯化后,将其作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,用间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫细胞化学染色检测抗体特异性.结果:成功地构建了重组表达载体pET-32a-Nanog,经诱导获得了大量Nanog融合蛋白,其主要以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度达到97％,经免疫的兔抗血清效价可达1∶32 000,并表现出较好的特异性.结论:成功地制备出高滴度、高特异性的兔抗Nanog融合蛋白抗体.

关键词：小鼠、Nanog、纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：宁夏回族自治区自然科学基金NZ1161

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：711-714