人核迁移蛋白shRNA慢病毒载体的构建及转导
目的:通过绿色荧光蛋白(GFP)标记,构建可示踪的人核迁移蛋白(hNUDC)慢病毒RNA干扰载体,并实现其对靶细胞的转导.方法:通过分子克隆技术将人核迁移蛋白的发夹RNA(shNUDC-F)克隆至慢病毒表达载体中,构建成靶向针对hNUDC的RNA干扰载体,通过磷酸钙转染法,将获得的慢病毒高纯度质粒转染进低次代293T细胞中进行包装,通过高速离心收获慢病毒颗粒,经滴度测定后,对Dami巨核细胞进行转导实验.用显微镜观察转导效率,用Wesernblot检测RNA干扰效果.结果:慢病毒携带的shNUDC-F片段对Dami巨核细胞能高效转导,并使其内源hNUDC基因发生基因沉默,干扰效果较好.结论:成功构建出慢病毒hNDUC RNA干扰载体,并在293T细胞中实现包装并成功转入Dami细胞.
慢病毒、RNA干扰、发夹RNA、巨核细胞
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Q78(基因工程（遗传工程）)
教育部科学技术研究重点项目210156;广东省卫生厅青年基金B2010235;广东医学院博士启动基金XB1007;广东省大学生创新实验项目KY1003;湛江市科技攻关项目2010C3111005
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
688-690,695
