CD40突变体融合蛋白真核表达载体的构建及表达

摘要：

目的:构建CD40突变体(muCD40)融合蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP/muCD40Ig,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达,以获得muCD40Ig融合蛋白,为检测体内可溶性muCD40分子建立实验基础.方法:从L929/muCD40基因转染细胞中通过RT-PCR扩增出人muCD40胞外段基因序列,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1恒定区基因,分别插入真核表达载体pIRES2-EGFP,采用Superfectin转染CHO细胞,G418筛选出能稳定分泌muCD40Ig蛋白的基因转染细胞并亚克隆.筛选出的阳性克隆经无血清培养后,收集上清进行Western blot检测；并收集细胞进行RT-PCR鉴定,同时用流式细胞仪分析muCD40Ig蛋白与CD40L的结合能力.结果:成功构建了人pIRES2-EGFP/muCD40Ig重组真核表达载体,PCR及Western blot结果显示该CHO基因转染细胞能够稳定分泌人muCD40Ig蛋白；流式检测muCD40Ig融合蛋白能够与CD40L分子结合.结论:获得了能稳定分泌人muCD40Ig的CHO基因转染细胞株,muCD40Ig融合蛋白具有与CD40L结合的能力.

关键词：CD40突变体、融合蛋白、真核表达

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金青年项目81101556;“重大新药创制”科技重大专项2009ZX09103-704;江苏省普通高校研究生科研创新计划项目CXZZ11_0110;苏州市科技发展计划SYSD2011084

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：673-676