人UL16结合蛋白3的原核表达及其多克隆抗体制备
目的:表达和纯化人UL16结合蛋白3(ULBP3)胞外段融合蛋白,制备兔抗人ULBP3多克隆抗体.方法:利用PCR技术获得人ULBP3分子胞外段的基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,构建出重组表达质粒pQE30-ULBP3( aa30-171).测序鉴定正确后转化人大肠杆菌感受态细胞M15,经IPTG 30℃诱导4h后,SDS-PAGE显示融合蛋白(表达产物)以包涵体形式存在.用镍柱对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白免疫新西兰白兔,采用流式细胞术(FCM)、Western blot法和免疫组化染色对所得多克隆抗体的生物学特性进行鉴定.结果:成功表达及纯化了人ULBP3( aa30-171)重组蛋白.结果显示该多克隆抗体能够识别大肠癌细胞株COL0205表面表达的天然构象ULBP3分子,而且能与结直肠癌组织细胞的ULBP3分子结合.结论:成功构建了原核表达载体pQE30-ULBP3(aa30-171),并获得高纯度的人pQE30-ULBP3(aa30-171)重组蛋白；成功制备了兔抗人ULBP3分子的多克隆抗体.
ULBP3、NKG2D、多克隆抗体
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R593.2(全身性疾病)
镇江社会发展支撑计划项目SH2011019;SH2008034;江苏大学临床医学发展项目JLY2010157
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
520-523
