人LC3蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备兔抗人LC3的多克隆抗体,为细胞自噬的研究提供有用的检测工具.方法:构建pET32a(+)LC3的原核细胞表达载体并进行序列鉴定,大肠杆菌BL21( DE3)中诱导表达LC3蛋白,SP-Sepharose XL柱纯化；纯化的人LC3蛋白免疫兔制备抗血清,通过LC3蛋白偶联的Sepharose 4B(LC3-Sepharose 4B)亲和层析纯化兔抗人LC3的多克隆抗体,以间接ELISA和Western blot鉴定其特异性.结果:成功实现了LC3蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化,并用质谱分析证明表达蛋白相对分子质量(M1)为15 500.制备的兔抗人LC3多克隆抗体具有很高的特异性,与大肠杆菌成分无交叉反应.Western blot能够特异检测自噬过程中LC3 Ⅰ型和Ⅱ型蛋白,观察到自噬发生时LC3 Ⅰ向LC3Ⅱ的转化.结论:获得了重组人LC3蛋白,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体,为细胞自噬的检测提供了有用的探针.

关键词：细胞自噬、LC3、抗体、原核表达

所属期刊栏目：28

分类号：Q78;R392-33(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划9732011CB910103

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：517-519,523