P2Y6稳定干扰乳腺癌细胞系的建立及其增殖能力评价

摘要：

目的:应用shRNA技术,构建P2Y6基因稳定干扰的乳腺癌细胞株,为P2Y6调控乳腺癌发生发展的功能及机制研究奠定基础.方法:以人P2Y6基因为靶序列,设计并合成干扰序列,并将其插入经EcoRI和AgeI酶切的PLKO线性化质粒.阳性克隆经EcoR Ⅰ和NdeⅠ酶切、测序正确后与ps-PAX2、pMD2.G和PLKO重组慢病毒载体共转染293T细胞,包装成完整病毒.病毒经富集后感染乳腺癌细胞BT549,经嘌呤霉素筛选P2Y6稳定干扰的乳腺癌细胞.通过RT-PCR、Western blot等方法检测P2Y6的干扰效率.最后通过MTS实验对P2Y6基因稳定干扰后乳腺癌细胞的增殖能力进行评价.结果:阳性克隆经DNA测序后与预期相符.稳定转染P2Y6shRNA的BT549细胞中P2Y6的mRNA和蛋白表达水平与对照组细胞相比明显下降.P2Y6基因干扰后乳腺癌细胞的增殖能力没有显著变化.结论:成功构建人P2Y6基因表达稳定干扰的乳腺癌细胞株BT549.P2Y6的表达与乳腺癌细胞增殖无明显相关性.

关键词：P2Y6、shRNA、慢病毒、增殖、乳腺癌细胞

所属期刊栏目：28

分类号：R392-33

资助基金：国家自然科学基金31000398;中央高校基本科研业务费专项78210023

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：510-513