活化的蛋白激酶C受体1真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建活化的激酶C受体1( RACK1) WD1-4真核表达载体,通过细胞转染和Western blot鉴定其是否在细胞中表达.方法:应用PCR法扩增RACK1蛋白中第1～4个WD40区域的片段,将其与PGEM-T载体连接,测序后再将其克隆至pEGFP-N1中.采用脂质体法将重组质粒转染至293T细胞中,观察其在真核细胞中的表达,并用Western blot法进行鉴定.结果:pEGFP-N1-RACK1 (WD1-4)重组质粒经酶切鉴定及测序证实,目的基因的序列完全正确.荧光显微镜观察发现,转染了重组质粒的细胞株可见绿色荧光融合蛋白的表达,Western blot结果进一步证实了上述结果.结论:成功构建pEGFP-N1-RACK1 (WD1-4)重组质粒且进行了真核表达,为下一步研究RACK1蛋白的功能奠定了基础.
RACK1蛋白、真核表达载体构建、蛋白表达
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R34(人体生物化学、分子生物学)
江苏省自然科学基金BK2009192;国家自然科学基金31071020
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
497-499
