分泌型小鼠IL-1β表达载体促进Hepa1-6肝癌细胞的增殖和迁移
目的:构建小鼠经典途径分泌型IL-1β真核表达载体,转染Hepal-6细胞后,检测胞质及上清中IL-1β分泌表达水平,并考察其对肝癌细胞体外增殖活性、迁移能力的影响.方法:利用特异性上下游引物将小鼠AFP信号肽序列和小鼠IL-1β成熟蛋白编码基因进行拼接后,再与pLIVETM载体进行连接,DNA测序鉴定阳性克隆；jetPEI法将重组载体、pLIVETM空载体、pLIVE -lacZ转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6后,经β-gal染色监测转染效率；各转染组经LPS及monesin 处理后双抗体夹心ELISA法分析细胞培养上清及细胞裂解液中IL-1β的表达水平；通过MTT方法分析经典途径分泌型IL-1β对细胞体外增殖活性的影响.结果:成功构建出了小鼠分泌型IL-1β真核重组表达载体pLIVE-smIL-1 β；β-gal染色后,显示外源基因在3d左右时转染效率最高；双抗体夹心ELISA法表明转染后与Hepal-6/mock组细胞相比,Hepal-6/smIL-1β组细胞胞质和上清中IL-1β的表达明显增高；MTT及细胞迁移实验分析证实,转染Hepal-6/smIL-1β组细胞体外增殖速度明显加快.结论:该表达载体可以通过经典途径分泌促炎性因子IL-1β且高效表达成熟肽IL-1β,并能够显著促进肿瘤细胞的体外增殖和迁移能力.
IL-1β、肝癌细胞、信号肽、经典分泌途径、迁移
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R392.9
国家自然科学基金30772497;山东省科技攻关计划2008GG10002007
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
488-491
