活化T细胞核因子对组成性启动子SV40的调控作用

摘要：

目的:利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子(NFAT)能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据.方法:用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ分别从质粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK启动子,克隆至pGL3-basic载体中,构建成pCMV-Luc和pTK-Luc载体.将构建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control(SV40启动子驱动),分别与SV40 (pBIND)和TK(pRL-TK)两种启动子驱动的两种内参质粒共转染入HEK293细胞；观察过表达组成性活化NFAT后相对荧光素酶活性读数的改变.结果:成功构建了pCMV-Luc和pTK-Luc质粒,荧光素酶活性检测发现,常见组成性启动子SV40启动子对过表达组成性活化的NFAT存在一定的反应.结论:T细胞活化过程中重要的转录因子NFAT能够调控SV40启动子活性；表明常见组成性启动子SV40并非真正、绝对的组成性不变.因此,在荧光素酶报告系统内参选择时需要充分考虑该问题,本研究为合理选择内参质粒提供了一个可行策略.

关键词：活化T细胞核因子、双荧光素酶报告系统、组成性启动子、内参

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金31100979

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：452-454