骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位

摘要：

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白.结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000.GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白.结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白.GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周.

关键词：ArgBP2、Western blot、免疫沉淀

所属期刊栏目：28

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金30800415;81070688

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：237-239