设计特异性识别HBV核心启动子的锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

摘要：

目的:设计特异性结合乙肝病毒核心启动子( HBVCp)的锌指蛋白(ZFP),观察ZFP在体外对HBV转录的抑制情况.方法:利用Zinc finger tools设计特异性结合HBV Cp的ZFP.将ZFP核苷酸序列人工合成后克隆至pEGFP-N1和pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pEGFP-N1/ZFP-Flag和pcDNA3.1(+)/ZFP.通过倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot鉴定pEGFP-N1/ZFP-Flag在COS-7中的表达情况；将pcDNA3.1(+)/ZFP转入HepG2.2.15细胞后24h,采用ELISA和FQ-PCR检测上清液中HBeAg和HBV DNA含量,RT-PCR检测细胞内HBV mRNA水平.结果:ZFP在COS-7细胞中能正常表达.与空质粒组相比,ZFP组细胞培养上清液中HBV DNA拷贝量和HBeAg含量明显降低(P＜0.05),细胞内HBV mRNA也显著减少.结论:人工设计的ZFP可以在真核细胞内正常表达,并能有效抑制HBV的转录.

关键词：乙肝病毒、核心启动子、锌指蛋白、HepG2.2. 15细胞

所属期刊栏目：28

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30772055;重庆市自然科学基金CSTC;2008BB5226

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：160-162