EB病毒融合蛋白ZtaN-p23在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定
目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合PCR法将两个基因进行连接,构建重组质粒pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2,并转化大肠杆菌BL21( DE3).加入IPTG诱导表达融合蛋白ZtaN-p23,通过SDS-PAGE和Western blot确定蛋白表达量及活性鉴定.结果:重组质粒pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2经双酶切鉴定和序列分析正确,证实已成功构建原核表达载体；SDS-PAGE显示诱导的蛋白Mr约46 000,与预期值一致；对融合蛋白表达条件进行优化后,发现其主要以包涵体的形式存在于细胞中；亲和层析结果显示纯化后的ZtaN-p23纯度＞95％；Western blot显示ZtaN-p23具有良好的生物活性.结论:成功构建原核表达载体pGEX- 4T-1-BZLF1 N-BLRF2,并在大肠杆菌中进行了表达纯化,融合蛋白显示出良好的活性.
EB病毒、BZLF1N基因、BLRF2基因、表达、纯化
28
R446.62(诊断学)
暨南大学科研培育与创新基金研究项目216113103;深圳市卫生局重点课题200608
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
120-123
