HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立
目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-FdttBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株.方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中；通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆；通过基因组PCR技术和Westemblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达.结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23 sFv-Fdt-tBid表达载体；成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株；成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达.结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础.
免疫促凋亡蛋白、HER2、真核表达、定点整合、CHO工程细胞株
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R392.9
国家自然科学基金81001015/H1611
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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