骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究

摘要：

目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体.方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子.经测序后亚克隆至pET30a并在E coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化.ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性.结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆.构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,Mr29 000和23 000有特异性目的条带.ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性；VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性.Western blot显示,重组VHH在Mr66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白.结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础.

关键词：单域抗体、SpaA-N、亲和淘洗、热稳定性、骆驼

所属期刊栏目：28

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31060132

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：55-58