人CD3ξRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定
目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ξ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆.方法:利用.DNA重组技术,设计3条60bp能转录产生靶向CD3ξ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+ gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建CD3ξ-pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明CD3ξ-pSUPER retroRNAi 重组质粒构建成功；脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功.结论:成功地构建了特异性沉默CD3ξ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究CD59与CD3ξ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据.
shRNA、CD3ξ、CD59、PA317、逆转录病毒载体
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R392.11
国家自然科学基金30972677
2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
40-42,45
