猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定
目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响.方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况.再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响.结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800.重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应.结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料.
XCL1、纯化蛋白、多克隆抗体、间接ELISA:MTT
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Q75(分子遗传学)
国家自然科学基金31072115;30270342;生物大分子国家重点实验室开放基金05SY021107;遗传资源与进化国家重点实验室开放基金GREKF09-05;"十二五"国家科技计划农村领域基础研究类首批预备项目NC2010CD0178
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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