鼠抗人CXCR3单克隆抗体的研制及生物学功能研究
目的:获得持续分泌鼠抗人CXCR3单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株；以鼠抗人CXCR3 mAb作为工具,研究人CXCR3分子的表达特性及CXCR3信号转导对L929 -huCXCR3和结肠癌细胞株的迁移及增殖的影响.方法:以高表达人CXCR3膜型分子的L929-huCXCR3细胞作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交技术,将免疫小鼠的脾脏细胞与同种系小鼠的骨髓瘤细胞sp2/0进行融合.以L929-huCXCR3作为筛选细胞,转染空载体的L929 -mock细胞作为阴性对照细胞,采用间接免疫荧光和流式细胞术,筛选能持续分泌抗人CXCR3 mAb的杂交瘤细胞株.采用Ig亚类快速定性试纸法和间接免疫荧光法对所获得的杂交瘤细胞株和mAb进行鉴定；用间接免疫荧光法分析CXCR3分子在肿瘤细胞表面的表达；Transwell隔离小室检测mAb对L929 -huCXCR3和结肠癌细胞株Colo205、HCT116及HT29迁移的影响；MTT法分析mAb对结肠癌细胞株Colo205增殖的影响.结果:获得了1株能持续分泌鼠抗人CXCR3 mAb的杂交瘤细胞株,命名为9B5.经快速定性试纸分析显示,该mAb重链为IgG1亚类,轻链为链；间接免疫荧光和流式细胞术分析显示,mAb 9B5可识别活化T淋巴细胞和结肠癌细胞株Colo205、HCT116及HT29表面的CXCR3分子.通过阻断CXCR3信号转导,mAb 9B5可抑制L929-huCXCR3细胞和结肠癌细胞株Colo205、HCT116和HT29的定向迁移及IP-10对Colo205的促增殖作用.结论:成功获得了1株能持续分泌鼠抗人CXCR3 mAb的杂交瘤细胞株,为研究CXCR3的表达特性及深入探讨CXCR3信号转导在肿瘤生长与转移过程中的作用及机制奠定了物质基础,并且有望为治疗肿瘤转移提供新的思路和新型药物.
CXCR3、单克隆抗体、趋化因子、肿瘤转移、细胞迁移
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R392.11
国家科技重大专项资助项目2009ZX09103-705
2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1325-1329
