TFR和VEGF基因双启动子调控的慢病毒载体构建及其表达研究

摘要：

目的:构建含有转铁蛋白受体(TFR)和血管内皮生长因子(VEGF)的双启动子慢病毒载体,体外转染中华小型猪骨髓间充质细胞并检测其表达.方法:PCR法分别扩增TFR和VEGF基因,分别克隆人pLenti-GFP-Neo慢病毒载体的CMV启动子和SV40启动子后,构建出双启动子调控的慢病毒表达载体pLenti-TG-VEGF.利用Lipofectin2000试剂将pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共转染293T细胞进行慢病毒包装,72 h后收集病毒上清,感染中华小型猪骨髓间充质细胞,并通过Western blot法检测TFR和VEGF的表达情况.结果:成功构建了含有TFR和VEGF基因的双启动子慢病毒载体；包装好的慢病毒颗粒可成功感染中华小型猪骨髓间充质细胞；Western blot法检测TFR和VEGF高水平的表达.结论:成功构建了双启动子调控的慢病毒载体pLenti-TG-VEGF,并建立其慢病毒表达系统,从而为进一步探讨活体内观察移植细胞携带治疗基因的MRI基因成像应用的可行性奠定了基础.

关键词：慢病毒载体、转铁蛋白受体、血管内皮生长因子、骨髓间充质干细胞

所属期刊栏目：27

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金面上项目30370821

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1319-1321,1324