空肠弯曲菌cjaA基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

摘要：

目的:原核表达空肠弯曲菌CjaA蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆目的基因并将其构建到pGEX-6p-1和pET30a(+)表达载体,分别以变复性纯化后的rGST-caA、rHis-cjaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性.结果:成功构建pET30a(+ )-cjaA和pGEX-6p-1-cjaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-cjaA和rGST-cjaA蛋白,Western blot试验显示全菌多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性.筛选获得3株稳定分泌抗CjaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2B6、3C2、4F11,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1∶1×105、1∶2×105和1∶4×105；Western blot试验显示,3株mAb均能与表达rHis-CjaA重组蛋白的细菌发生特异性反应；Dot-ELISA试验表明,3株mAb均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应.结论:本研究制备的mAb有较高特异性,具有良好的应用价值.为进一步研究空肠弯曲菌CjaA蛋白的生物学特性、致病机制,以及建立快速检测技术奠定基础.

关键词：CjaA蛋白、空肠弯曲菌、单克隆抗体

所属期刊栏目：27

分类号：R392.11

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1204-1207