人GALNT3-sol蛋白的原核表达和抗体制备
目的:构建人乙酰半乳糖胺转移酶3可溶性区域( GALfVI3-sol)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化GALN13 -sol蛋白,制备小鼠抗人GALIVI3-sol多克隆抗体,并对抗体的基本特性进行了检测.方法:RT-PCR扩增编码人GALIVI3 -sol的cDNA片段(1 755 bp),将其克隆至原核表达载体pET15b中,转化大肠杆菌B121( DE3)后,诱导表达人GALNr 13-aol重组蛋白.将变性、复性和电泳纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清.分别采用EL ISA和Westem blot检测抗体的效价和特异性.结果:成功构建了pET15b/CALArl3-so/原核表达载体,转BI21( DE3)后可高效表达重组蛋白GALIVI3-sol.获得的小鼠抗人GALN,l3_sol多克隆抗血清效价达1:25 600,并有良好的特异性.结论:成功获得人GALN'13-sol蛋白,得到了效价和特异性良好的小鼠抗人GALIVI3-sol抗体,为进一步研究人GALNT3在肿瘤组织中的表达提供了可靠的材料.
GALNT3、大肠杆菌、多克隆抗体
27
R392.11
国家重点基础研究发展计划973资助项目2007CB914800;国家自然科学基金青年项目资助31000368
2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1117-1120
