体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础.方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆人原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1 -VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb.通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定.结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链.5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成.结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础.

关键词：人VEGF165、单克隆抗体、HUVEC、血管形成、细胞迁移

所属期刊栏目：27

分类号：R392.1

资助基金：国家自然科学基金资助项目30801497;扬州大学研究生创新基金资助项目2008

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1098-1102