人RGS22蛋白表达及多克隆抗体制备
目的:构建人RGS22真核表达载体,表达人RGS22蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生和肿瘤转移中的作用.方法:以cDNA文库为模板,用PCR法扩增人的RGS22基因.将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-RGS22.将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达.表达产物用质谱鉴定.纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度.结果:用PCR法扩增出3 800 bp的RGS22基因编码框,测序证实为人RGS22基因,并在BL21菌中表达RGS22重组蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到人RGS22蛋白.质谱分析其肽混合物的肽质量指纹谱,数据库检索证实为RGS22蛋白.用纯化的RGS22重组蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万.结论:制备了RGS22的多克隆抗体,为进一步研究RGS22在精子发生中的作用创造了有利条件.
蛋白表达、人RGS22蛋白、抗体制备
27
Q786(基因工程（遗传工程）)
江苏省教育厅创新基金JX22013009;国家自然科学基金资助项目81000272
2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
997-999
