鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

摘要：

目的:研制鼠抗人B7-H4分子的单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性.方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交技术,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选、多次克隆化培养,获得两株可特异分泌鼠抗人B7-H4分子mAb的杂交瘤细胞株.采用快速定性试纸分析法鉴定mAb所属的Ig亚类.用Dot-blot、Western blot鉴定mAb的特异性,竞争结合抑制实验鉴定mAb所识别的抗原结合位点,T细胞增殖抑制阻断实验对mAb的生物学功能进行初步的鉴定.结果:获得两株持续、稳定地分泌抗B7-H4 mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1F10和2B2.Dot-blot的结果显示,两株mAb均能特异性识别B7-H4分子.Western blot检测显示,mAb 2B2可以特异性识别B7-H4分子,而mAb 1F10则不能识别.位点竞争实验表明,两株mAb之间,mAb 1F10与商品化的mAb H74之间识别位点不同,mAb 2B2与商品化mAb识别位点相近.T细胞增殖抑制阻断试验显示,这两株mAb均能一定程度地阻断B7-H4对T细胞的抑制作用.结论:成功地获得两株抗人B7-H4分子的mAb,为进一步研究B7-H4分子的生物学功能提供了有效的工具.

关键词：B7-H4、单克隆抗体、杂交瘤

所属期刊栏目：27

分类号：Q813.2(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2011-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：887-890