抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测

摘要：

目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定.方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株.表达产物经Ni-NTA柱纯化,120g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定.应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性.结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确.bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株.120g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合.FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合.结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性.

关键词：双特异单链抗体、CD3、VEGFR2

所属期刊栏目：27

分类号：B392.11

资助基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金2008RFXXS018

在线出版日期：2011-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：883-886