禽流感病毒M2胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达及其免疫原性分析
目的:构建禽流感病毒M2基因胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达载体,并对表达、纯化的重组蛋白进行免疫原性的分析.方法:以含有全长M2基因的质粒19T-M2为模板PCR扩增获得M2e,通过PCR及同尾酶连接的技术构建一系列的M2e多拷贝中间载体,得到顺次连接的9个拷贝M2e(9c),将其克隆到原核表达载体pET-32a中,经酶切和DNA测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达情况.用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取动物血清作ELISA检测M2e特异性抗体IgG并取脾脏细胞作ELISpot检测细胞分泌IFN-γ的情况.结果:结果显示,重组菌能够表达出一条相对分子质量(M,)约为45 000的可溶性融合蛋白(M2e-9c),该蛋白表达量约占菌体表达量的37.2%.纯化蛋白免疫小鼠后,M2e特异性IgG滴度可达到1×104,:M2e肽段能够刺激免疫组小鼠脾细胞分泌IFN-γ且具有一定的浓度依赖性.结论:M2e多拷贝重组蛋白可以诱导小鼠产生抗M2e特异性的抗体反应和细胞免疫反应,说明该蛋白具有良好的免疫原性,为流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础.
禽流感病毒、M2、原核表达、免疫原性、ELISpot
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P392.11
教育部博士点基金资助项目20070019034
2011-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
760-762,766
