小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达
目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平.方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,'Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平.结果:经SOE法拼接获得的融合基因与CenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepal-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化.结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β.
鼠白细胞介素1β、信号肽、分泌表达、肝癌细胞
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R392.12
国家自然科学基金资助项目30772497;山东省卫生高层次人才专项基金2008年;山东省科技攻关计划项目2008GG10002007;潍坊医学院青年教师科研启动基金KQ07007;山东省潍坊市科技局资助项目200803068
2011-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
744-746
