红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建
目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法.方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数.结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好.结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体.
融合基因、RNA干扰、shRNA
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R392.12
教育部科学技术研究重点项目210156;广东省卫生厅青年基金B2010235;广东医学院博士启动基金XB1007;广东省大学生创新实验项目KY1003
2011-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
740-743
