HPV-16E1蛋白的表达、纯化及其抗体制备

摘要：

目的:在原核细胞中表达、纯化人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)E1蛋白并制备HPV-16 E1特异性抗体.方法:PCR扩增HPV-16 E1基因,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株.通过改变诱导温度与IPTG 浓度优化HPV-16 E1蛋白可溶性表达的条件,并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白.纯化蛋白经皮下及足垫免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性.结果:酶切和测序结果表明HPV-16 E1基因已克隆入pMAL-p2x.经优化筛选出HPV-16 E1融合蛋白诱导表达的最佳条件为28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L.经麦芽糖亲和层析法纯化获得了HPV-16 E1可溶蛋白,纯度达到95.7%.Western blot检测证明制备的抗血清能与HPV-16 E1蛋白特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1:640 000以上.结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得了HPV-16 E1蛋白,该蛋白免疫新西兰白兔制备了高效价的HPV-16 E1蛋白抗血清,为HPV-16 E1功能研究提供了抗原和检测用抗体.

关键词：HPV-16、E1基因、原核表达、纯化、抗体

所属期刊栏目：27

分类号：R392.7

资助基金：国家自然科学基金资助项目31060025

在线出版日期：2011-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：644-646,649