兔抗重组人钙网蛋白抗体的制备及其特性鉴定

摘要：

目的:制备兔抗人钙网蛋白抗体并进行特性鉴定.方法:用PCR法扩增人钙网蛋白(CRT)基因,并克隆至pET32a表达载体中.以重组质粒pET32a/hCRT转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化目的蛋白.以纯化的hCRT 为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗体,用ELISA法、Western blot和免疫组化染色法检测抗体的效价和特异性.结果:成功地表达并纯化hCRT重组蛋白.以纯化的重组hCRT免疫新西兰大白兔制备的抗体,ELISA检测其效价为1:51 200,Western blot分析显示,该抗体能与hCRT特异性结合.免疫组化染色法检测结果表明,该抗体能识别天然的hCRT.结论:以重组hCRT为免疫原,成功地制备效价高、特异性好的兔抗hCRT抗体,为进一步进行钙网蛋白的检测及其临床应用研究奠定了基础.

关键词：钙网蛋白、表达、抗体、制备、兔

所属期刊栏目：27

分类号：R392.7

资助基金：广东省湛江市科技招标项目2007年度;广东省医学科研基金项目A2008653

在线出版日期：2011-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：641-643