我国地方品种鸡IL-17cDNA的克隆、表达及鉴定
目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性.方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17.将重组质粒pGEX-6P-1-CHIL17转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物.结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%.酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中.重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr,约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性.结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单克隆抗体的研制奠定了基础.
鸡、IL-17、克隆、原核表达
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30871860,BK2010039;江苏省自然科学基金资助项目BK2008011;江苏省高校"青蓝工程"资助项目
2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
456-458
