白斑综合症病毒极早期蛋白IE3的原核表达、纯化和鉴定
目的:构建对虾白斑综合症的极早期基因IE3的原核表达载体,制备纯化重组蛋白IE3.方法:以感染白斑综合症病毒的对虾心脏组织为模板,PCR法扩增极早期基因IE3基因的编码序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组质粒pGEX-4T-2-IE3.质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达GST-IE3融合蛋白,并利用SDS-PAGE和Western blot对表达的蛋白进行鉴定.结果:PCR产物大小及其双酶切鉴定均证明所克隆的基因是IE3,DNA序列测定进一步证实与GenBank报道的序列完全一致.成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-2-IE3,并在大肠杆菌中高效表达出相对分子质量(Mr)约33000的具有可溶性的融合蛋白,且Western blot证实确为目的蛋白.结论:成功构建了重组表达载体pGEX-4T-2-IE3,并表达出重组蛋白GST-IE3.为进一步研究对虾白斑综合症的防治提供了平台.
克隆、白斑综合症病毒、极早期蛋白
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R392
国家自然科学基金资助项目30800857;福建省自然科学基金计划项目2010J05074;中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室开放基金LMB101005;国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室开放研究基金HY201102
2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
454-455
