人BTLA分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
目的:表达并纯化重组人BTLA(hBTLA)分子胞外区,制备和鉴定兔抗hBTLA多克隆抗体,为进一步实验研究奠定基础.方法:采用特异性引物扩增hBTLA胞外功能区DNA,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a-hBTLA.将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21(DE3)菌株,采用IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度.将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对抗体进行纯化、效价测定及特异性鉴定.结果:序列测定证实构建的pET28a-hBTLA重组表达载体含有hBTLA编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(MT)为15720的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯化后的目的蛋白达到电泳纯.双向琼脂扩散法检测抗体效价为1:16,ELISA法检测抗体效价为1:20000,Western blot分析显示抗体能特异性结合重组hBTLA蛋白.结论:成功构建了hBTLA蛋白的原核表达载体,获得高纯度的融合蛋白.制备高效价、高特异性的多克隆抗体.
BTLA、原核表达、多克隆抗体
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R392.1
国家自然科学基金资助项目30972779/C0809;广东省自然科学基金博士启动项目8452402301001083;广东省科技计划项目2009B030801333
2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
419-421
