Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定
目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)蛋白.方法:用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因GITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中.以pFastBacHTA-GITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座.筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒.反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定.结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒.在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得蕈组杆状病毒.Western blot法鉴定显示,在Mr 20000处有特异性的蛋白条带.结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础.
GITRL、杆状病毒、真核表达、小鼠
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R392.12
国家自然科学基金资助项目30871193,81072453,30972748,30910103087;江苏省卫生厅科研基金资助项目H2009052;江苏省教育厅自然科学基金资助项目08KJB320002;江苏大学"拔尖人才"工程项目资助2008年
2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
405-407
