脂肪分化相关蛋白对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响
目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响.方法:(1)采用PCR的方法,以成年SD大鼠心肌cDNA为模板扩增编码ADRP全长的DNA序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒,进行酶切和测序鉴定;(2)采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒转染H9c2心肌细胞株,经G418筛选获得抗性细胞克隆后扩大培养;荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白报告基因表达情况;RT-qPCR和Western blot检测转染细胞与正常细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平;(3)采用流式细胞术检测不同浓度软脂酸对上述细胞细胞凋亡率的影响.结果:(1)酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入表达质粒pEGFP-C1;(2)荧光显微镜观察细胞内有绿色荧光蛋白表达且传20代以上无消失;RT-qPCR和Western blot证明重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01);(3)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9c2细胞凋亡率明显低于空质粒转染组和正常H9c2细胞组(P<0.05).结论:(1)成功构建了H9c2细胞真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,获得了稳定表达ADRP基因的H9c2心肌细胞株;(2)ADRP能够抑制软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用.
脂肪分化相关蛋白、H9c2心肌细胞、软脂酸、凋亡
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R392.12
国家自然科学基金资助项目30270627
2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
382-385
