小鼠p38MAPK重组腺病毒载体的构建及其在成骨细胞系中的表达

摘要：

目的:利用AdEasyTM system构建携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,感染成骨细胞系MC3T3-E1,检测外源p38MAPK在细胞中的表达.方法:用PCR的方法扩增p38MAPK基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行测序.经Bgl Ⅱ和Hind Ⅲ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-CMV-p38MAPK.将经Pme Ⅰ线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasyTM DNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Adp38MAPK,再将经Pac Ⅰ线性化的Ad-p38MAPK重组病毒骨架质粒转染AD293包装细胞,包装并扩增病毒.用Ad-p38MAPK感染小鼠MC3T3-E1成骨样细胞,以Western blot法检测p38MAPK在小鼠成骨细胞中的表达.结果:构建并包装表达p38MAPK蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染小鼠成骨细胞系MC3T3-E1并高表达p38MAPK蛋白.结论:成功地构建了携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,为研究p38MAPK在成骨细胞中的作用奠定了实验基础.

关键词：p38MAPK、腺病毒、成骨细胞

所属期刊栏目：27

分类号：R71(妇产科学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30772261

在线出版日期：2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：367-369,373