Cyr61基因siRNA表达载体的构建及沉默作用研究

摘要：

目的:构建Cyr61靶向siRNA重组表达载体,为探讨抑制Cyr61基因表达对机械通气所致肺损伤的研究奠定基础.方法:根据GenBank数据库提供的Cyr61基因核苷酸序列,选择设计3条能转录siRNA的DNA序列,命名Cyr61-1siRNA,Cyr61-2 siRNA,Cyr61-3 siRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照.据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil1.1载体,转化扩增后进行序列测定.4种重组表达载体转染肺癌A549细胞,逆转录RT-PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测Cyr61的表达.结果:经酶切鉴定和测序结果证实Cyr61靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞Cyr61 mRNA和蛋白的表达抑制率分别为60.54%和52.97%.结论:Cyr61靶向siRNA重组表达载体构建成功并能显著抑制Cyr61基因的表达.

关键词：Cyr61、RNA干扰、基因治疗

所属期刊栏目：27

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金资助项目30930089

在线出版日期：2011-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：360-363