起搏基因质粒的构建及体外转染心肌细胞的研究
目的:构建重组起搏基因质粒pIRES2-EGFP-HCN2, 并检测其在体外心房肌细胞中的表达, 探讨其构建生物起搏器的可行性.方法:对含mHCN2 cDNA的Pm载体进行转化和扩增, 将所得mHCN2基因定向克隆到真核表达载体plRES2-EGFP中, 进行双酶切来鉴定克隆的正确性.将重组质粒用电穿孔法转染心房肌细胞, 通过免疫荧光及RTPCR检测重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2在体外心房肌细胞中的表达情况.而对照组仅转染pIRES2-EGFP.结果:构建了重组质粒plRES2-EGFP-HCN2.荧光显微镜下可见转染起搏基因后的心房肌细胞呈绿色荧光, 其搏动频率较未转染的细胞及对照组明显增快(180士11次/分vs140±14次/分vs143±12次/分, P<0. 05).实验组RT-PCR及免疫荧光显示 了mHCN2 mRNA基因及蛋白的表达, 而对照组未见到该基因片段及其荧光表达.结论:成功地构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2, 并在体外心房肌细胞中成功表达, 为生物起搏的研究奠定基础.
起搏、增强型绿色荧光蛋白、心肌细胞、转染
27
R329.12(人体形态学)
国家自然科学基金资助项目30801131;教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目200804861045
2011-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
345-347
