诱导型eIF3g人工microRNA表达载体的构建及应用

摘要：

目的:构建可用四环素调控的针对人eIF3g的人工microRNA表达载体,用于抑制肿瘤细胞中eIF3g的表达.方法:利用网络资源设计针对人eIF3g的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至四环素调控表达系统的pRevTRE2载体上,得到pRevTRE2-eIF3g-microRNA.将四环素调控表达系统的Tet-off质粒转染K562细胞获得稳定转染克隆后,再利用带有报告基因GFP的pRevTRE2-GFP转染选择调控能力较好的K562/Tet-off细胞株,将pRevTRE2-elF3g-microRNA转染K562/Tet-off细胞,Western blot检测eIF3g的表达,以研究eIF3g人工microRNA的作用效果.结果:DNA测序结果显示,针对人eIF3g的人工microRNA的克隆正确.pRevTRE2-GFP转染结果表明所选择的K562/Tet-off细胞株有较好的诱导功能.Western blot结果显示,转染pRevTRE2-elF3g-microRNA的K562/Tet-off细胞可用四环素调控eIF3g人工microRNA的表达从而抑制K562细胞中eIF3g的表达.结论:成功构建了可用四环素调控的eIF3g人工mi-croRNA表达载体,能有效调控K562细胞中eIF3g的表达.

关键词：eIF3g、microRNA、四环素诱导表达系统

所属期刊栏目：27

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30471955;浙江省自然科学基金资助R206060

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：135-138