新基因PKHDL1产物Fibrocystin-L的抗体制备及其亚细胞定位的初步研究

摘要：

目的:制备FPC-L蛋白的多克隆抗体,对PKHDLI基因产物进行初步的细胞生物学研究.方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增编码人类FPC-L的N端633L-768K的cDNA片段.将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生人类FPC-L抗原(hFL-N).纯化目的蛋白并制备兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体.Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位.结果:成功地构建了hFL-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现表达,并制备了hFPC-L蛋白的多克隆抗体hFL-Np.通过生化和细胞学方法证实了该抗体针对FPC-L的特异性和揭示了该蛋白的亚细胞定位.结论:成功制备了高效价并具特异性的兔抗FPC-L蛋白多克隆抗体,并揭示了该蛋白主要表达于细胞质内,为进一步研究PKHDLI基因产物的生物功能奠定了基础.

关键词：PKHDL1基因、Fibrocystin-L、多克隆抗体、亚细胞定位

所属期刊栏目：27

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金资助项目30672483,30870501,81072688;北京市自然基金资助项目7102133

在线出版日期：2011-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：78-81