人HMGB1 B box蛋白的表达、鉴定及其单克隆抗体的制备
目的:表达人HMGB1 B box蛋白,制备其单克隆抗体(mAb),为进一步研究HMGB1 B box在免疫调节和抗感染免疫中的作用奠定基础.方法:将pET28-HMGB1 B box转化DH5α摇菌表达,使用His标记的蛋白纯化柱纯化、鉴定后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行常规融合,经间接ELISA筛选阳性克隆,获得分泌人HMGBI B box蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western blot等方法鉴定其特性(mAb的效价、Ig类别及特异性).结果:成功地建立了2株稳定分泌抗人HMGB1 B box的mAb细胞株,分别命名为1D2F4E3和2D4E3A2.2株mAb的免疫球蛋白类型均为IgG,Western blot显示,2株mAb均能与HMGB1 B box发生特异性反应,其滴度为1×106,mAb1D2F4E3和2D4E3A2的A450值分别为0.324±0.093和0.296±0.085.结论:获得了2株分泌HMGB1 B box mAb的细胞株,为HMGB1 B box蛋白的生物学功能研究奠定了基础.
HMGB1、蛋白表达、单克隆抗体
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30871193,81001319;江苏省高校自然基金资助项目09KJB310001;江苏省高校博士创新基金资助项目CX09B_217Z;江苏省卫生厅面上项目H200859
2011-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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