人Gax基因真核表达载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达
目的:构建人Gax基因真核表达载体,并观察在兔血管平滑肌细胞中的表达.方法:通过PCR从pCMV-SPORT6-Gax质粒中扩增出人Gax cDNA片段,经双酶切后装入到有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,经限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定后通过梭华-Sofast转染试剂介导重组质粒转染至兔血管平滑肌细胞中进行表达.通过荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白表达和RT-PCR扩增转染细胞的cDNA来鉴定Gax在兔血管平滑肌细胞中的表达.结果:琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物人Gax基因片段约915 bp,与预期分子量相符;酶切分析和测序鉴定证明人Gax真核表达载体pEGFP-N1-Gax连接正确;荧光显微镜观察到重组质粒转染细胞中有绿色荧光蛋白表达,及RT-PCR证明转染细胞有人Gax mRNA表达.结论:成功构建人Gax基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-Gax,并证实在兔血管平滑肌细胞中表达,为进一步研究Gax基因在心血管病中的作用提供了实验基础.
Gax基因、真核表达、基因转染、兔血管平滑肌细胞
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R543;Q753(心脏、血管（循环系）疾病)
上海市科委基金资助项目08411964100;上海市级医院临床科研资源共事平台经费资助SHDC12007206
2011-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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