一种重组β-内酰胺酶的原核表达,纯化及其活性检测

摘要：

目的:利用原核表达系统诱导表达一种可以用于肿瘤生物治疗ADEPT(单抗导向酶活化前药)的重组蛋白RGD4CβL,并对该蛋白进行纯化以及活性检测.方法:对合成的DNA序列进行测序,将重组载体pColdⅡ-RGD4CβL转化人大肠杆菌E.coli BL(DE3),在大肠杆菌细胞中诱导表达目的蛋白,用His标签纯化树脂Ni-NTA纯化目的蛋白,以流式细胞术(FCM)检测纯化所得蛋白的活性.结果:合成的DNA全长为1125 bp,其在E.coli BL(DE3)中经IPTG诱导后表达出相对分子质量(Mr)约为42 000的目的蛋白,经纯化后获得了产率和纯度均很高的重组蛋白RGD4CβL,流式细胞检测证明该蛋白具有很好的肿瘤细胞靶向性.结论:成功地对重组蛋白RGD4CβL进行了诱导表达,得到的纯化蛋白具有较好的肿瘤细胞靶向性,该重组蛋白将可能成为一种免疫原性更低的新型双功能蛋白用于ADEPT.

关键词：ADEPT、重组蛋白、β-内酰胺酶、流式细胞术

所属期刊栏目：27

分类号：R392.33

资助基金：天津市自然科学基金资助项目08JCYBJC07400

在线出版日期：2011-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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