猪新基因BCL-GL的克隆与原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的:克隆猪的BCL-GL基因,进行原核表达,并制备出其多克隆抗体.方法:以提交NCBI的人的BCL-GL基因序列为种子序列,对猪的ESTs数据库进行比对拼接,得到contig序列.根据这个序列设计克隆引物,以猪脾脏总RNA反转录得到的cDNA为模板,PCR得到克隆序列.克隆序列经测序验证后,连接到原核表达载体pET-32a,构建成重组表达载体pET32a-BCL-GL,然后将重组载体转化到大肠杆菌BL21进行诱导表达.经His-标签融合蛋白纯化试剂盒纯化得到纯化蛋白制备豚鼠多克隆抗体.结果:抗体ELISA效价为1:800,Western blot反应特异性良好.结论:成功地克隆了猪BCL-GL基因,并进行了原核表达,制备了特异性豚鼠抗BCL-GL血清,为进一步研究其功能奠定基础.

关键词：猪BCL-GL基因、克隆、原核表达、多克隆抗体

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分类号：R392.12

资助基金：遗传资源与进化国家重点实验室开放基金资助项目GBEKF09-05;国家自然科学基金资助项目30270342;西北农林科技大学引进人才基金资助项目01140406

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1238-1240,1245