人丙氨酸氨基转移酶(ALT2)的表达、单克隆抗体制备及鉴定

摘要：

目的:克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT2),以此作为抗原免疫动物获得针对ALT2的单克隆抗体(mAb)株,用于ALT的免疫诊断.方法:通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT2)基因,并将其克隆至pET-28a表达载体中,带有组氨酸标签的ALT2蛋白经镍亲和层析纯化,纯化的ALT2作为抗原免疫小鼠制备mAb,通过Western blot和ELISA方法测定mAb的亲和力和特异性.结果:利用大肠杆菌成功表达ALT2蛋白,以镍亲和层析纯化获得ALT活性超过10 000 U/L的ALT2目的蛋白,以此蛋白免疫小鼠后得到5株mAb.结论:经过初步筛选获得2株高特异性的mAb,为研制ALT2蛋白定量检测试剂提供了重要工具.

关键词：丙氨酸氨基转移酶、表达、单克隆抗体、ELISA

所属期刊栏目：26

分类号：Q291

资助基金：国家科技支撑计划课题资助2007BAI07A22

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1232-1234,1237