小鼠Ccr2基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立
目的:构建小鼠Ccr2基因真核表达载体,转染RAW264.7,建立稳定转染Ccr2的RAW264.7细胞系.方法:应用RT-PCR从小鼠脾脏组织中扩增Ccr2 mRNA全序列,插入真核表达载体pEGFP-N1中.用脂质体将重组质粒pEGFP-Nl/Ccr2转染RAW264.7细胞,通过G418筛选建立Ccr2稳定转染的RAW264.7细胞系.经RT-PCR、Western blot检测、荧光显微镜和流式细胞仪FCM检测,了解Ccr2在RAW264.7细胞中的表达水平及细胞内定位.结果:成功构建了pEGFP-N1/Ccr2重组质粒,建立了稳定转染的RAW264.7细胞株.RT-PCR和Western blot检测证实,Ccr2基因在该细胞系中成功表达,荧光显微镜下观察到该基因定位于细胞膜上,FCM显示90%以上的细胞膜上均有CCR2的表达.结论:构建了Ccr2真核表达载体并建立了稳定转染的RAW264.7细胞株.为进一步研究MCP1/CCR2信号通路在结核杆菌诱导巨噬细胞凋亡中的作用奠定了基础.
趋化因子受体、真核表达、转染、RAW264.7细胞
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30660158;宁夏自然科学基金NZ0781;宁夏医科大学重点项目XZ200902
2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1214-1216,1219
