实时荧光定量PCR检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因的表达

摘要：

目的:建立可用于测定淋巴细胞免疫功能的SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR技术.方法:根据NCBI基因库中4种基因(NKG2D、穿孔素、颗粒酶B和内参照GAPDH)的序列,设计合成相应的引物,扩增上述基因.建立SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR方法,检测肿瘤患者外周血淋巴细胞和诱导培养的患者CIK细胞(cytokine induced killer,CIK)中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B mRNA的含量.结果:应用设计的引物扩增NKG2D、穿孔素和颗粒酶B基因后,经琼脂糖凝胶电泳和溶解曲线分析表明具有特异性.SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测结果表明,肿瘤患者的淋巴细胞中颗粒酶B基因的表达降低,而经细胞因子和单克隆抗体诱导培养的肿瘤患者CIK细胞与其淋巴细胞相比,细胞中穿孔素和颗粒酶B基因的表达明显增加(P＜0.01).结论:该SYBRGreen Ⅰ实时荧光定量PCR方法可用于检测淋巴细胞中NKG2D、穿孔素和颗粒酶B的mRNA的表达、作为研究淋巴细胞免疫功能的有力手段.

关键词：实时荧光定量PCR、细胞免疫、NKG2D、穿孔素、颗粒酶B

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：云南省后备人才基金资助项目2008Y003

在线出版日期：2010-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1108-1110